口腔上皮细胞生物论文5300字_口腔上皮细胞生物毕业论文范文模板

　　导读：口腔上皮细胞生物论文5300字在进行写作的时候，也都是会有很多严格要求的，所以在写作之前必定会做好相关的准备工作，比如说参考前人的写作方式等等，本论文分类为细胞生物论文，下面是小编为大家整理的几篇口腔上皮细胞生物论文5300字范文供大家参考。

　　口腔上皮细胞生物论文5300字(一)：不同生物状态白色念珠菌对口腔上皮细胞的黏附能力及ALSmRNA表达论文

　　[摘要]目的观察不同生物状态白色念珠菌对口腔上皮细胞的黏附能力及ALSmRNA表达，以期揭示口腔白色念球菌感染机制。方法将白色念珠菌3683、SC5314、3630与来源于50名健康志愿者的口腔上皮细胞混合培养，采用革兰阳性染色观察白色念珠菌的黏附能力，采用荧光定量RT-PCR法检测白色念珠菌3683、SC5314、3630中ALS2及ALS3mRNA表达情况。采用SPSS15.0统计学软件进行数据分析。结果黏附实验结果显示，3株白色念珠菌均可黏附于口腔上皮细胞，且菌株3683黏附数量明显多于菌株SC5314和菌株3630，统计学比较显示，差异有统计学意义（P<0.05），而菌株SC5314和菌株3630黏附数量比较，差异无统计学意义（P>0.05）。荧光定量RT-PCR结果显示，白色念珠菌3683、SC5314、3630中均能检测到ALS2及ALS3mRNA表达，其中，菌株3683ALS2及ALS3mRNA表达水平均高于菌株SC5314和菌株3630，统计学比较显示，差异有统计学意义（P<0.05）；菌株3630ALS2及ALS3mRNA表达水平均高于菌株SC5314，但两者比较，差异无统计学意义（P>0.05）。结论不同生物状态白色念珠菌的口腔上皮细胞黏附能力不同，菌株黏附能力的强弱可能与其ALS2及ALS3基因情况表达相关。

　　[关键词]白色念珠菌；口腔上皮细胞；黏附能力；基因表达

　　[中图分类号]R781[文献标识码]A[文章编号]1673-7210（2015）09（b）-0016-04

　　白色念珠菌为条件致病菌，长居于人体口腔、皮肤、胃肠道等部位，在维持机体生态平衡方面发挥重要作用。近年来由于免疫抑制剂、抗生素等的广泛使用，及糖尿病、艾滋病等发病率的逐年增加，导致患者机体免疫力低下，菌群失衡，使得白色念球菌大量繁殖，口腔白色念球菌感染率增加。白色念球菌的致病力与其黏附性有关[1-2]。研究显示，在小鼠感染模型中，口腔感染念球菌分离株3683、皮肤感染念球菌分离株3630及系统感染血液念球菌分离株SC5314致病能力差异较大，各菌株的黏膜黏附力不同可能是影响其致病能力的原因之一[3]。ALS基因家族主要编码白色念珠菌细胞壁表面的糖蛋白，与白色念珠菌和宿主间的黏附性密切相关。有研究证实，白色念球菌ALS基因在生物膜中的表达升高[4-5]。本研究刮取人口腔上皮细胞，并与白色念珠菌3683、SC5314、3630混合培养，检测不同生物状态白色念珠菌对口腔上皮细胞黏附能力及ALSmRNA表达情况，以期观察不同白色念珠菌致病力的差异，探讨其感染作用机制。

　　1材料与方法

　　1.1材料

　　白色念珠菌3683、SC5314、3630购自于ATCC；人口腔上皮细胞来源于50名健康志愿者。

　　1.2试剂与仪器

　　沙堡液体培养基、RPMI1640培养基及胎牛血清均购自美国Gibco公司；青霉素、链霉素及胰蛋白酶均购自美国Sigma公司；EDTA及细胞计数板购自上海碧云天生物技术有限公司；Trizol购自美国Invitrogenin公司；荧光定量PCR试剂盒购自宝生物工程（大连）有限公司；引物购自上海生工；摇床购自德国UniEquip公司；ABI3900台式高通量DNA合成仪、ABI9700PCR仪及ABI7500全自动荧光定量均购自美国ABI公司。

　　1.3白色念珠菌培养

　　将白色念珠菌3683、SC5314、3630接种于20mL沙堡液体培养基中，于摇床培养18h（37℃，200r/min）。收集细菌，PBS洗2次，调整菌密度为1×107個/mL。

　　1.4人口腔上皮细胞获取及培养

　　以细胞刮棒刮取来自浙江省温岭市第一人民医院的50名健康志愿者口腔上皮细胞，PBS洗两次，置于含10%小牛血清的RPMI1640培养基中，调整细胞密度为1×107个/mL。

　　1.5黏附能力检测

　　将口腔上皮细胞与白色念珠菌3683、SC5314、3630以1∶100比例混合置于6孔板内，在摇床中孵育1h（37℃，100r/min）。行革兰阳性染色，显微镜下随机选择50个口腔上皮细胞，计数每个口腔上皮细胞上黏附的白色念珠菌数。实验重复3次。黏附能力计算为念球菌数/口腔上皮细胞数。

　　1.6荧光定量RT-PCR

　　1.6.1白色念珠菌

　　白色念珠菌培养同“1.3”项下，PBS洗3次，调整菌密度为2×106个/mL。

　　1.6.2口腔上皮细胞

　　细胞获取同“1.4”项下，调整细胞密度为2×105个/孔接种于6孔板。

　　1.6.3共培养及观察

　　将口腔上皮细胞与白色念珠菌3683、SC5314、3630分别以1∶10比例混合，RPMI1640培养基培养，接种于6孔板，每孔1.5mL，培养6h，光学显微镜观察后，收集细胞，离心，置于-80℃冰箱保存。

　　1.6.4.引物设计

　　ALS2：上游引物：5'-CCAAGTATTAACAAAGTTTCAATCACTTAT-3'，下游引物：3'-TCTCAATCTTAAATTGAACGGCTT-5'，引物长度为366bp。

　　ALS3：上游引物：5'-CCACTTCACAATCCCCATC-3'，下游引物：3'-CAGCAGTAGTAGTAACAGTAGTAGTTTCATC-5'，引物长度为342bp。

　　GAPDH：上游引物：5'-TTGACGGTCCATCCCACAA-3'，下游引物：3'-GGAATAACCTTACCAACGGCTTT-5'，引物长度为103bp。

　　1.6.5总RNA提取

　　用预冷的DEPC水1mL清洗白色念珠菌，置于1.5mLEP管中，加入1mLTrizol，静置5min；加入0.2mL氯仿，盖紧EP管，上下倾倒15s，室温静置2～3min，4℃12000r/min离心15min，取上清；加入0.5mL异丙醇，-20℃放置1h，4℃12000r/min离心10min，弃上清；75%乙醇洗2次，4℃12000r/min离心5min，弃上清，吸取残存乙醇；无菌台干燥5～10min，加DEPC水溶解，-80℃保存备用。

　　1.6.6RNA纯度检测

　　应用紫外分光光度计检测RNA纯度，分别测定260nm和280nm波长下RNA的吸光度，计算A260/A280，若比值在1.8～2.0之间则提示RNA质量较好。

　　1.6.7逆转录反应

　　反应体系为5×逆转录buffer2μL、RNA酶抑制剂0.5μL、dNTP2μL、RNasefreedH2O7.5μL、OligodT1μL、Mgcl24μL、AMV反转录酶1μL、RNA模板2μL，反转录体系共计20μL；混匀后置于PCR仪中，反应条件为：42℃1h，99℃5min；得到cDNA模板，置于-20℃保存。

　　1.6.8荧光定量PCR

　　1.6.8.1标准品制备阳性标准品：预实验PCR扩增阳性产物经琼脂糖凝胶电泳，紫外光下切割目的条带。采用回收试剂盒回收纯化。利用A260测得值和片段长度计算其浓度，作为阳性标准品。阴性标准品：采用灭菌双蒸水。

　　1.6.8.2反应体系5×SYBRGreenⅠPCRbuffer10μL，上游引物1μL，下游引物1μL，dNTPs1μL，Taq酶1μL，cDNA或陽性标准品1μL，ddH2O35μL，反应体系共计50μL。

　　1.6.8.3反应条件95℃3min，95℃30s，50℃45s，共行42个循环。

　　1.6.8.4数据测定反应结束后，电脑分析结果，RNA表达=目的基因拷贝数/GAPDH基因拷贝数。

　　1.7统计学方法

　　采用SPSS15.0统计学软件进行数据分析，计量资料数据用均数±标准差（x±s）表示，多组间比较采用单因素方差分析，组间两两比较采用LSD-t检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

　　2结果

　　2.1白色念珠菌对口腔上皮细胞的黏附能力

　　白色念珠菌3683、SC5314、3630与口腔上皮细胞共培养1h后，革兰染色结果显示，3株白色念珠菌均可黏附于口腔上皮细胞，且菌株3683黏附数量（15.74±0.83）明显多于菌株SC5314（13.04±0.62）和菌株3630（13.11±0.57），差异有统计学意义（P<0.05），而菌株SC5314和菌株3630黏附数量比较，差异无统计学意义（P>0.05）。

　　2.2ALS2及ALS3mRNA表达情况

　　念珠菌口腔与上皮细胞混合培养6h，显微镜下观察显示口腔上皮细胞形态完整，周围黏附有白色念球菌，部分细胞已破裂为细胞碎片。基因检测结果显示，混合培养6h后，白色念珠菌3683、SC5314、3630中均能检测到ALS2及ALS3mRNA表达，其中，菌株3683ALS2及ALS3mRNA表达率均高于菌株SC5314和菌株3630，统计学比较显示，差异有统计学意义（P<0.05）；菌株3630ALS2及ALS3mRNA表达水平均高于菌株SC5314，但两者比较，差异无统计学意义（P>0.05）。见表1。

　　3讨论

　　白色念球菌是人体重要的机会致病菌，调查表明，近年白色念球菌的检出率逐年升高，其导致的医院感染排在第4位，且死亡率高达50%左右[6-7]。研究已经证实，黏附性为白色念球菌的致病机制之一[8]。过往白色念球菌对口腔上皮细胞的黏附性研究较多，但不同生物状态白色念珠菌黏附性的差异鲜有报道。本研究观察白色念珠菌3683、SC5314、3630对口腔上皮细胞的黏附能力，对治疗选择的临床指导意义重大。

　　本研究黏附实验是将白色念珠菌与口腔上皮细胞混合培养，观察一定时间后每个口腔上皮细胞黏附白色念珠菌数，该方法可直观证明菌株的黏附力，且操作简单[9]。本研究黏附实验结果显示，3株白色念珠菌均可黏附于口腔上皮细胞，且菌株3683黏附数量明显多于菌株SC5314和菌株3630，统计学比较显示，差异有统计学意义（P<0.05），而菌株SC5314和菌株3630黏附数量比较，差异无统计学意义（P>0.05）。提示白色念珠菌株3683的黏附力最强，其对口腔的致病力最强。导致不同生物状态白色念珠菌对口腔上皮细胞黏附能力差异的原因有待进一步分析。Zhao等[10]研究证实，野生型白色念球菌株（CA112）、剔除ALS3基因的白色念球菌株（als3/als31843）及剔除了ALS1基因的白色念球菌株（als1/als11467）对颊上皮细胞和血管内皮包被的细胞培养板的黏附作用不同，其中，菌株als3/als31843对颊上皮细胞和血管内皮细胞的黏附数明显较低，而菌株als1/als11467仅对血管内皮细胞的黏附能力较低。该结果提示了ALS家族基因功能的差异性及ALS3基因可能参与了白色念珠菌的黏附作用机制。

　　研究 、临床医学与药物、优良品种繁育以及细胞治疗五个方面，以下分别对这五个领域的应用现状展开详细的分析。

　　1.粮食和蔬菜生产

　　作为应用生物细胞工程收益最大的领域，粮食与蔬菜产生可以说在利用生物细胞工程之后取得了十分大的进步。就水稻和小麦而言，通过应用花药进行单倍体培育，小麦品种已经达到了三十多个，水稻品种更是达到了一百多种。可以说在农作与的育种领域，我国对于生物细胞工程技术的应用，已经达到了世界领先水平。并且相比较于传统的农作物品种而言，应用生物细胞工程技术能够有效的筛选出更加优良的品种，从而有效的缩短培养周期。

　　2.园林花卉

　　然后就是生物细胞工程在园林花卉当中的应用，在应用的过程当中主要是为了实现微繁殖已经去除病害虫。一把情况下，果实如果已经携带了病毒，那么将会直接将病毒遗传给下一代，而生物细胞工程的应用就有效的培育出了一种去除病毒的试管苗，住原理在于能够将果实营养体当中的病毒直接去除掉，或者是预防果实体当中可能出现的病毒，确保果实的质量，并加快其生长周期。在当前，我国已经研制出了数十种果树去病毒试管苗技术，大大提高了果实的品质，也有效促进了细胞工程的产业化。

　　3.临床医学与药物

　　病毒性疾病一直在医疗过程当中的一个重难点。而随着动物细胞融合技术的应用获得了单克隆抗体之后，已经有效的解决了病毒性疾病的治疗问题，并实现了误诊率的降低。在当前，单克隆抗体在临川医学当中的治疗也越来越广泛，能够在缺乏临床症状的情况之下就检测出极小的肿瘤病院，从而治疗心肌梗塞等疾病。此外，单克隆抗体还能够对于排卵期进行准确的检测，并利用精子和卵细胞研制出避孕药等。

　　4.优良品种繁育

　　生物细胞工程技术也被广泛的运管用于畜牧业当中，通过对胚胎移植和人工受精的应用，能够大大提高动物的交配数量及范围，并应用体外受精技术实现品种质量的提高，最终繁育出优良的品种。

　　5.细胞治疗

　　最后一个应用领域就是细胞治疗。随着医学技术的进步，细胞治疗的应用也逐渐覆盖到了很多个领域，例如说糖尿病、神经系统疾病等等。相关研究显示，间充质干细胞、神经干细胞等等可以直接参与细胞的再生和修复，最终参与到组织的修复当中，达到治疗的目的。

　　二、生物细胞工程的未来展望

　　就当前而言，生物细胞工程在粮食和蔬菜生产的应用效果十分好，能够实现农作物的生产达到百分之三十以上，因此就可以通过大力推广生物细胞工程在粮食和蔬菜生产当中的应用，实现我国农业农作物的高产、优质。

　　农业对于人类的生存而言十分重要，尤其是当前人口数量的不断上涨，只有通过不断提高农作物生产总量的方式才能够满足人类的物质需求。要想实现这一点，就必须采取更加科学合理的育种技术，也就是生物细胞工程技术。

　　生物细胞工程技术有多个特点及优势：繁殖快速，后代无病虫害且纯度高，运输管理方便，培养条件简单等等，那么在未来各个领域的应用能够实现这些领域的迅速发展。当前现如今，我们也需要为生物细胞工程的应用开辟更加广阔的市场，使其能够得到最大化的应用，最终产生巨大的社会效益和经济效益。

　　小结：总而言之，当前生物细胞工程的应用已经算是十分广泛了，所取得的效果、社会效益和产生的经济效益十分巨大。但是相信在未来，随着我国对于生物细胞工程的重视，生物细胞工程在今后的应用前景必然会更加广泛，所取得的效益也会更加巨大。本文主要对于生物细胞工程的应用现状以及生物细胞工程的未来展望两个方面對于生物细胞工程的现状及未来展望展开详细分析。可供相关人士参考。