生物洋葱表皮细胞论文5200字_生物洋葱表皮细胞毕业论文范文模板

　　导读：生物洋葱表皮细胞论文5200字在写作的时候必定会参考一些文献的，需要大量和广泛的阅读找出一些专业论点然后通过自己的见解来进行详细的论证，所以阅读相关的范文也是非常重要的，本文分类为细胞生物论文，下面是小编为大家整理的几篇生物洋葱表皮细胞论文5200字范文供大家参考。

　　生物洋葱表皮细胞论文5200字(一)：影响洋葱表皮细胞骨架制片效果的探讨论文

　　摘要：以洋葱表皮细胞为材料，探究其经卡诺氏液固定后进行细胞骨架制片观察时，1%TritonX－100抽提非骨架蛋白的最佳时间，并研究洋葱不同表皮细胞及经不同理化因素处理的材料，经卡诺氏液固定后进行细胞骨架制片的步骤及制片效果。结果表明：经卡诺氏液固定后，1%TritonX－100抽提非骨架蛋白内表皮30min较佳，外表皮25min较佳；不同成熟度的鳞片叶细胞骨架形态及稳定性有差异；经紫外线、温度、秋水仙素处理后增加固定步骤再制片对制片观察结果基本无影响。

　　关键词：洋葱表皮；细胞骨架；卡诺氏；紫外线；温度；秋水仙素

　　细胞骨架是活细胞内蛋白质纤维为主要成分的网络结构[1]，包括微管、微丝和中间纤维三种不同类型的纤维结构，分为细胞质骨架和细胞核骨架两大类。细胞骨架在细胞的生命周期中有着至关重要的作用，与生命活动密切相关[2]，不仅在维持细胞形态和细胞内部结构的有序性起着重要作用，还与物质输运、细胞运动、信息传递、能量转化、细胞分裂和分化、细胞的凋亡和癌变等生命活动相互联系。[3－4]关于细胞骨架的研究是生物科学研究中最为活跃的领域之一。用显微观察细胞骨架形态是为了能更深入了解认识和探究细胞骨架的功能、作用机制的基础。

　　洋葱表皮细胞是研究植物细胞骨架的一种常用材料，在实际试验中如能先固定保存要观察的材料，再统一制片观察，可方便操作。本试验参考文献[5]和文献[6]，以洋葱表皮细胞为研究对象，在制片前增加了卡诺氏液固定这一步骤，探究其经卡诺氏固定后制片的效果，优化1%TritonX－100抽提非骨架蛋白的最佳时间，研究洋葱鳞茎不同部位，以及温度、紫外线、秋水仙素等不同因素处理后，经卡诺氏液固定对制片效果的影响，并对洋葱内外表皮、不同成熟度洋葱鳞片叶内表皮细胞骨架进行比较。从显微结构上就秋水仙素、紫外线、低温、高温处理材料经卡诺氏液固定后进行细胞骨架的制片观察效果的影响进行探究，并对这些影响因素进行分析讨论，为与细胞骨架相关的教学和科研提供参考。

　　1材料和方法

　　1.1材料

　　1.1.1实验材料

　　新鲜洋葱鳞茎

　　1.1.2实验仪器

　　冰箱（－18℃和2℃），培养箱（GXZ－300C），水浴锅（HH－4），紫外灯（20W），显微镜（BA310－T），显微摄影系统。

　　1.1.3实验试剂

　　所用试剂均为分析纯，配制方法参考杨汉民[7]，具体如下：①0.01mol／L磷酸盐缓冲生理盐水（PBS，pH值6.8）：Na2HPO4－NaH2PO4缓冲液（PB，pH值7.3）0.2mol／L50mL，NaCl0.15mol／L，蒸馏水加至1000mL（0.2mol／L的Na2HPO477mL与0.2mol／L的NaH2PO423mL混合后取50mL）；②M－缓冲液：咪唑（pH值6.7）50mmol／L，KCl50mmol／L，MgCl20.5mmol／L，EGTA1mmol／L，EDTA0.1mmol／L，巯基乙醇1mmol／L，甘油1mmol／L，用1mol／LHCl调pH值至7.2；③1%TritonX－100／M－缓冲液：用1mLTritonX－100加M－缓冲液定容到100mL；④0.2%考马斯亮蓝R250染液：考马斯亮蓝R2500.2g，甲醇46.5mL，冰醋酸7mL，蒸馏水46.5mL；⑤固定液一：3%戊二醛／PB溶液，pH7.3；固定液二：卡诺氏液（无水乙醇－冰醋酸混合液）3∶1。

　　1.2方法

　　1.2.1制片方法的研究

　　⑴洋葱细胞骨架制备的抽提时间优化。制片方法参考佟树坤[5]：取新鲜洋葱鳞茎内表皮4张，大小约0.5cm×0.5cm，分别放于编号为1、2、3、4的载玻片上，分别滴两滴0.01mol／L磷酸盐缓冲液（PBS）轻轻漂洗细胞3min／3次，再滴加1%TritonX－100，分别处理洋葱内表皮15、20、25和30min（优化最佳观察条件），用PBS液冲洗2次，滴加M－缓冲液轻轻洗细胞2min，3次，滴加3%戊二醛／PBS液固定细胞15min，PBS液洗细胞2次，约3min，滤纸吸干后滴加0.2%考马斯亮蓝R250染色20min，吸干染液，滴加清水封片，显微镜下观察并拍照[8]。实验重复3次。

　　⑵材料经卡诺氏固定后对制片的影响。取洋葱鳞茎内表皮若干张，大小约0.5cm×0.5cm，完全浸泡在卡诺氏液中24h。取出材料，根据本节⑴的制片步骤，探究洋葱细胞经固定保存后，经相同制片方法是否能清晰显示细胞骨架。实验重复3次。

　　1.2.2不同材料的比较

　　⑴比较洋葱鳞茎鳞片叶内、外表皮细胞骨架。分别取大小为0.5cm×0.5cm洋葱幼叶内、外表皮各2片，浸泡在卡诺氏液中24h后，置于2个载玻片上，制片方法同1.2.1（1），显微镜下观察并拍照。实验重复3次。

　　⑵比较洋葱鳞茎中边缘已发褐的鳞片叶、正常外侧鳞片叶及鳞茎内部幼嫩鳞片叶的内表皮细胞骨架。分别取大小为0.5cm×0.5cm洋葱三种材料各2片，浸泡在卡诺氏液中24h后，置于载玻片上，经制片方法处理，观察细胞骨架形态结构。实验重复3次。

　　1.2.3不同理化条件处理后经卡诺氏液固定对细胞骨架制片的影响

　　⑴温度处理后卡诺氏液固定对细胞骨架制片的影响。撕取洋葱鳞茎上的鳞叶，分别在－18℃冰箱、2℃冰箱、50℃培养箱和25℃培养箱（对照）中处理1h。处理后，分别完全浸泡于4个装有卡诺氏液的试剂瓶，固定24h后，观察细胞骨架形态结构。实验重复3次。

　　⑵秋水仙素处理后卡诺氏液固定对细胞骨架制片的影响。取大小为0.5cm×0.5cm的洋葱鳞茎表皮6张，2张浸入0.1%的秋水仙素溶液，2张浸入0.2%的秋水仙素溶液中，2张浸入蒸馏水中，分别处理24h。处理后，分别完全浸泡于3个装有卡诺氏液的试剂瓶，固定24h后，观察细胞骨架形态结构。实验重复3次。

　　⑶紫外线照射后卡诺氏液固定对细胞骨架制片的影响。撕取洋葱鳞茎上的鳞叶，置于4个培养皿中，分别在紫外灯下照射0（对照组）、30、60和120min。处理后，分别完全浸泡于4个装有卡诺氏液的试剂瓶，固定24h后，观察细胞骨架形态结构。实验重复3次。

　　2结果与分析

　　2.1卡诺氏液固定对制片的影响

　　鳞片叶经卡诺氏固定后，经制片，可以清楚地观察到细胞骨架（图1A），与未经卡诺氏液固定（图1B）后制片效果差别不明显。卡诺氏固定液一般是适用于植物组织和细胞的固定，而固定液的重要特性是能迅速穿透细胞，将其固定。实验结果表明，洋葱细胞先固定再抽提对观察效果基本没有影响。因此，在实验材料不方便及时观察时，尤其是野外考察时，可以先浸置在卡诺氏液中保存数日，待要观察时再取出来制片观察即可。

　　2.2内表皮固定后1%TritonX－100抽提时间对细胞骨架的观察影响

　　经卡诺氏液固定后，1%TritonX－100抽提非骨架蛋白时间对细胞骨架的观察影响。从图2可知，经卡诺氏液固定后，1%TritonX－100处理25min以上，均可清晰地观察到细胞骨架（图2，C和D），但处理25min的细胞中仍然有少量杂质碎片，影响实际观察效果。而1%TritonX－100处理20min，细胞中的膜蛋白碎屑等杂质较多，看不清楚细胞骨架（图2B）；用1%TritonX－100处理15min，细胞中含有大量的非骨架蛋白，几乎显示不出细胞骨架（图2A）。实验表明：TritonX－100是一种非离子去垢剂，1%TritonX－100抽提时间过短，会造成脂质和蛋白质抽提不完全（图2A），而对于经卡诺氏液固定后制片时，抽提30min（图2D）观察效果较为理想。

　　2.3不同取材制片效果比较

　　2.3.1内外表皮

　　从固定后的洋葱鳞片叶外表皮细胞骨架形态中可观察到细胞内有被染色的网状结构，且经相同方法处理的内、外表皮细胞都可观察到细胞骨架（图3）。从图3A可知，经卡诺氏液固定化的洋葱鳞片叶外表皮细胞，经过1%TritonX－100抽提20min的细胞骨架没有呈现出来；从图3B可知，经过1%TritonX－100抽提25min的细胞骨架会比较清晰完整；从图3C可知，经过1%TritonX－100抽提30min的细胞骨架明显不完整甚至很少了。从实际制片操作上考虑，外表皮的细胞骨架最佳抽提时间更短，选择外表皮为材料可缩短制片时间，但选材更倾向内表皮，撕取外表皮时常会附着较多叶肉细胞，且外表皮还有可能受色素干扰。

　　2.3.2不同成熟度鳞片叶

　　不同成熟度洋葱鳞片叶内表皮细胞骨架形态如图4所示。从图4A观察出发褐鳞片叶的细胞骨架已瓦解，细胞核明显，并且细胞内的物质集中于核一侧。由图4B可见抽提时间25min细胞骨架清晰完整。由图4C可以观察到发褐鳞片叶经抽提20min的细胞骨架的基本轮廓，但杂质太多，显示不够清晰。由图4D可见鳞茎内部幼嫩鳞片叶细胞骨架很密集但有零散颗粒状，细胞骨架观察不清楚。实验表明，发褐鳞片叶经过同样的时间处理后的细胞骨架相对于正常外侧鳞片叶的细胞骨架来得脆弱，细胞骨架较容易被破坏。而鳞茎内部幼嫩鳞片叶经过与正常外侧鳞片叶相同处理后， 能力，养成实事求是的科学态度

　　重点：

　　1、细胞结构及各部分主要功能的知识。

　　2、临时装片的制作。

　　难点：

　　制作和观察临时装片

　　实验仪器及用品：显微镜、稀碘液、镊子、滴管、纱布、吸水纸、载玻片、洋葱、刀片、解剖针。

　　实验装置图及说明

　　1、擦载玻片、盖玻片

　　2、滴：在载玻片中央滴一滴稀碘液

　　3、切、撕洋葱内表皮

　　4、放、展撕取的薄膜

　　5、盖盖玻片

　　6、吸去多余的稀碘液

　　实验操作改进：

　　（一）、制作临时装片

　　1、用干净的纱布把载玻片和盖玻片擦拭干净。

　　2、把载玻片放在实验台上，用滴管在载玻片中央滴一滴稀碘液。

　　3、选用新鲜的洋葱放置一周，在撕取洋葱内表皮前，先用刀片在内表皮划取一块边长为1厘米的正三角形（切忌划透），然后用解剖针沿洋葱表皮的纵向剥离一个小口，再用镊子也沿纵行的方向撕取。

　　4、把透明表皮从洋葱鳞片叶撕下后，把表皮朝内粘着少许叶肉的一面向上，表皮朝外光滑的一面向下，平展在载玻片上的稀碘液中，并用解剖针轻轻地把内表皮压几下，排除内表皮下的气泡。

　　5、用镊子夹起盖玻片，使它的一侧先接触载玻片上的液滴，然后缓缓放平。

　　6、用吸水纸吸去多余的稀碘液。

　　（二）、观察

　　1、调整好显微镜，注意不要使用太大的光圈。因为如果染色不深，在强光下不易看清细胞核。

　　2、把制成的临时装片放在显微镜下观察，找到细胞，仔细观察细胞的各部分结构。

　　3、整理

　　实验创新点及其意义

　　（一）取材：学生在撕下洋葱鳞片叶内表皮时容易出现以下问题：

　　1、撕下的表皮带有少许果肉，在显微镜视野里看到的就是棱角不清晰的细胞。

　　2、撕取的内表皮过大，在盖上盖玻片后有部分内表皮在盖玻片以外，从而使视野中容易出现气泡。

　　3、撕下的内表皮蜷曲，不易在载玻片上展平，视野中看到的细胞有重叠。

　　改进的方法：选用新鲜的洋葱先放置一段时间，在撕取洋葱内表皮前，先用刀片在内表皮划取一块边长为1厘米的正三角形，然后用解剖针沿洋葱表皮的纵向剥离一个小口，再用镊子也沿纵行的方向撕取。注意在撕取洋葱鳞片叶内表皮前，先用刀片在内表皮划取一块边长约1厘米的正三角形，然后用镊子夹取三角形的一角轻轻撕取，再把内表皮展平在载玻片上的清水中，并用解剖针轻轻地把内表皮压几下，排除内表皮下的气泡。建议载玻片上的水滴最好用凉开水，实践证明凉开水在盖上盖玻片时，不容易出现气泡。关于染色剂，用稀释的碘酒（在4～5滴水里加一滴碘酒）染色效果较好。关于染色方法，建议可先在载玻片上的水滴中加一滴稀释的碘酒或碘液，然后放进洋葱内表皮，再盖上盖玻片，吸去溢出的、多余的染色剂，实践证明染色效果非常好。

　　（二）染色：

　　按传统的染色方法，用吸水纸引流时，碘液不是从盖玻片的下方经过，而是从两侧经过，染色效果不好。

　　改进方法：1、将原实验中的最后一步染色改到原实验中的第二步。改后的顺序是擦、滴（碘液）、撕、展、盖、吸。这样操作就简单多了，效果也不错。2、把撕下的表皮朝内粘着少许叶肉的一面向上，表皮朝外光滑的一面向下，这样表皮细胞就容易被碘液染上色。

　　（三）盖盖玻片：

　　教材中要求学生用镊子夹住盖玻片一侧的边缘，将它的一侧先接触水滴，然后轻轻放平，盖在薄膜上。

　　改进的方法：

　　学生用镊子夹住盖玻片一侧的边缘，将它的一侧先接触水滴，然后再慢慢地降低盖玻片，当水漫过盖玻片的一半，并超过洋葱表皮的位置时，再慢慢放平盖玻片。这样，可以避免产生气泡。

　　（四）观察：观察时不宜采用太大的光圈。这样就可以避免因染色不深而看不清细胞核。

　　教师巡视指导，各组的实验组长监督组员操作是否规范，要求每个人都要操作、都要观察，并将观察结果进行交流。组长将大家在显微镜下的发现画到科学记录本上赞同。经过以上的改进后，学生能更好地认出细胞结构，激发了学生对微观世究兴趣，进而对生物科学产生更大的神秘感和求知欲，为学好生物学奠定了基础。生物是一门以实验为基础的自然学科，许多概念和原理的得出来源于严谨的科学实验，一旦在某方面有了新的观点又会采用实验的方法去探究。由此可见，实验在整个生物领域中起着举足轻重的作用。